冠心病是導(dǎo)致人類死亡的主要病因之一，再灌注是急性心肌梗死最有效的治療手段，但再灌注損傷是影響再灌注治療的重要因素[1]。心肌在經(jīng)歷缺血后，當(dāng)再恢復(fù)血液供應(yīng)時(shí)，由于能量衰竭，氧自由基生成，鈣超載，炎癥反應(yīng)，細(xì)胞凋亡等因素，缺血心肌及周圍組織會(huì)受到進(jìn)一步的損傷[1-2]。因此預(yù)防及減輕再灌注損傷已成為抗心肌梗死的熱點(diǎn)問題。

　　[摘要]目的：研究銀丹心腦通及其主要成分配伍對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)性作用。方法：采用全心停灌再灌注的方法建立大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型。SD大鼠分為空白組（control），模型組（model），銀丹心腦通全方組（YDXNTC），銀杏提取物組（GBE），丹參醇提物組（SM-E），丹參水提物組（SM-H），混合物組（燈盞細(xì)辛，三七，山楂，絞股藍(lán)，大蒜，天然冰片；MC），銀杏+丹參醇提物配伍組，銀杏+丹參水提物配伍組，丹參醇提物+丹參水提物配伍組。離體心臟平衡后，空白組正常灌流70min；模型組正常灌流10min，停灌30min，復(fù)灌30min；給藥組以含有相應(yīng)藥物的灌流液正常灌流10min，余同模型組。實(shí)驗(yàn)過程中全程記錄心電圖，觀察室性心動(dòng)過速/室顫（VT/VF）發(fā)生率，心臟停跳時(shí)間，復(fù)跳時(shí)間，正常律動(dòng)時(shí)間及心率失常持續(xù)時(shí)間。復(fù)灌結(jié)束后，將心肌勻漿，測(cè)定SOD活力，MDA，LDH，CK-MB和心肌鈣蛋白I（cTnI）釋放量。結(jié)果：①銀丹心腦通全方組，丹參醇提物，丹參水提物，混合物能夠延長(zhǎng)心臟停跳時(shí)間，縮短復(fù)跳時(shí)間、正常律動(dòng)時(shí)間及心率失常持續(xù)時(shí)間，但對(duì)VT/VF發(fā)生的發(fā)生沒有明顯作用。銀杏提取物對(duì)減少?gòu)?fù)跳時(shí)間、正常律動(dòng)時(shí)間及心率失常持續(xù)時(shí)間有較好作用，同時(shí)能夠改善VT/VF的發(fā)生。除銀杏+丹參水提配伍對(duì)心臟停跳時(shí)間無明顯影響以外，主要成分配伍對(duì)心臟停跳時(shí)間，復(fù)跳時(shí)間，正常律動(dòng)時(shí)間及心率失常持續(xù)時(shí)間均有良好作用，且銀杏+丹參醇提對(duì)VT/VF發(fā)生也有明顯作用。②銀丹心腦通全方組，銀杏提取物，丹參醇提物，銀杏+丹參醇提物配伍組，丹參醇提物+丹參水提物配伍組能夠提高心肌SOD活力，降低MDA含量；丹參水提物，混合物，銀杏+丹參水提物配伍組僅使MDA含量降低。③銀丹心腦通全方組和丹參水提物減少了LDH的釋放。銀杏提取物，丹參醇提物，丹參水提物及銀杏+丹參醇提物配伍降低了CK-MB含量。④銀杏+丹參醇提物配伍抑制了cTnI的釋放。結(jié)論：銀丹心腦通、主要成分及主要成分配伍對(duì)心肌缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抗氧化，減輕鈣超載有關(guān)。

　　[關(guān)鍵詞]中國(guó)全科醫(yī)學(xué)雜志投稿,銀丹心腦通,主要成分配伍,心肌缺血再灌損傷,保護(hù)作用

　　銀丹心腦通是由銀杏，丹參，燈盞細(xì)辛，三七，山楂，絞股藍(lán)，大蒜，天然冰片精制而成的天然苗藥制劑[3-4]。臨床上主要用于冠心病心絞痛，心律失常，心肌梗死等[3]。其相關(guān)研究主要集中在臨床應(yīng)用及療效觀察方面，有關(guān)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用離體心臟灌流模擬缺血再灌注損傷研究了銀丹心腦通及主要成分配伍對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，為探討其主要作用物質(zhì)基礎(chǔ)奠定基礎(chǔ)。

　　1材料

　　1.1藥品與試劑

　　銀杏提取物（GBE），丹參醇提物（SM-E），丹參水提物（SM-H），混合物（燈盞細(xì)辛，三七，山楂，絞股藍(lán)，大蒜，天然冰片；MC），均由貴州百靈制藥股份有限公司提供。乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（批號(hào)20130927）、丙二醛（MDA）試劑盒（批號(hào)20130911）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（批號(hào)20130912），均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。肌酸激酶同工酶（CK-MB）試劑盒（批號(hào)20131010）、心肌鈣蛋白I（cTnI）試劑盒（批號(hào)20131010），均購(gòu)自上海藍(lán)基生物科技有限公司。

　　1.2動(dòng)物

　　健康SD雄性大鼠，250～300g，SPF級(jí)，購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，合格證號(hào)SCXK（京）2011-0012。

　　1.3儀器

　　Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)（西班牙PanLab公司）；FI55002蠕動(dòng)泵（法國(guó)吉爾森公司）；MP150多導(dǎo)生理記錄系統(tǒng)（美國(guó)Bipac公司）；DFM-96γ放射免疫分析儀（合肥眾城電子系統(tǒng)有限責(zé)任公司）；MK3酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技有限公司）。

　　2方法

　　2.1提取物制備[5]

　　2.1.1銀杏提取物制備銀杏葉粉碎，稀乙醇加熱回流提取，合并提取液，回收乙醇，濃縮物加至大孔吸附樹脂柱上，1次用水及不同濃度乙醇洗脫，收集相應(yīng)洗脫液，回收乙醇，真空干燥，粉碎成極細(xì)粉，總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)25.4%，K-H液配制，用于實(shí)驗(yàn)。

　　2.1.2丹參醇提物制備乙醇回流提取2次，過濾，合并濾液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎成極細(xì)粉，丹參酮ⅡA質(zhì)量分?jǐn)?shù)5.31%，K-H液配制，用于實(shí)驗(yàn)。

　　2.1.3丹參水提物制備2.1.2項(xiàng)的藥渣加水煎煮2次，過濾，合并濾液，濃縮成清膏，加乙醇使醇含量達(dá)70%，攪勻，靜置，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎成極細(xì)粉，酚酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)70.91%，K-H液配制，用于實(shí)驗(yàn)。

　　2.1.4混合物制備燈盞細(xì)辛（野黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.75%）、絞股藍(lán)（絞股藍(lán)總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)20.90%）、山楂（酚類質(zhì)量分?jǐn)?shù)9.49%）及三七（總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)5.49%）加水煎煮2次，過濾，合并濾液，濃縮，加乙醇使醇含量達(dá)70%，攪勻，靜置，取上清液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎成極細(xì)粉；大蒜提取大蒜油（大蒜素質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.73%）；天然冰片研成極細(xì)粉（質(zhì)量分?jǐn)?shù)81.48%）；將各成分混合備用，K-H液配制，用于實(shí)驗(yàn)。

　　2.1.5配伍組制備分別將上述銀杏提取物、丹參醇提物、丹參水提物的極細(xì)粉兩兩混合，K-H液配制，用于實(shí)驗(yàn)。2.2分組

　　SD大鼠分為空白組（control），模型組（model），銀丹心腦通全方組（YDXNTC），銀杏提取物組（GBE），丹參醇提物組（SM-E），丹參水提物組（SM-H），混合物組（燈盞細(xì)辛，三七，山楂，絞股藍(lán)，大蒜，天然冰片MC），銀杏+丹參醇提物配伍組（GSEC），銀杏+丹參水提物配伍組（GSHC），丹參醇提物+丹參水提物配伍組（SEHC），根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定給藥劑量，每組6只，見表1。

　　2.3模型建立

　　SD大鼠用20%的烏拉坦麻醉，迅速摘取心臟置于Langendorff離體心臟灌流裝置，用Krebs-Henseleit灌流液以恒定速度進(jìn)行灌流（K-H液：NaCl118g，NaHCO324g，CaCl2・2H2O2.5g，KCl4.7g，KH2PO41.2g，MgSO4・7H2O1.2g，Glucose11mmol・L-1，pH7.4）[6-7]。裝置內(nèi)部保溫系統(tǒng)保持心臟溫度37℃，灌流液持續(xù)通以95%O2-5%CO2的混合氣體。連接MP100多導(dǎo)生理記錄系統(tǒng)，將2根電極分別插在心尖部（+）和主動(dòng)脈根部（-），全程記錄離體心臟的心電圖。穩(wěn)定15min后，空白組正常灌流70min；模型組正常灌流10min，停灌30min，復(fù)灌30min；藥物處理組用含有藥液的K-H液正常灌流10min，其余操作同模型組[6-8]。

　　2.4指標(biāo)檢測(cè)

　　2.4.1心電圖指標(biāo)觀察實(shí)驗(yàn)過程中全程記錄心電圖，觀察VT/VF發(fā)生率，心臟停跳時(shí)間，復(fù)跳時(shí)間，正常律動(dòng)時(shí)間，心率失常持續(xù)時(shí)間。

　　2.4.2抗氧化指標(biāo)檢測(cè)復(fù)灌結(jié)束后，立即取下心臟，稱取心尖部組織用生理鹽水制成10%的心肌勻漿，離心后取上清-20℃凍存。按照試劑盒操作測(cè)定SOD，MDA含量。

　　2.4.3心肌酶指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，迅速摘下心臟，稱取心尖部組織用生理鹽水制成10%的心肌勻漿，離心后取上清-20℃凍存。按照試劑盒操作檢測(cè)LDH，CK-MB。

　　2.4.4心肌鈣蛋白I（cTnI）測(cè)定方法同2.3.3。

　　2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

　　數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05被認(rèn)為有顯著性差異。

　　3結(jié)果

　　3.1對(duì)心率失常的影響

　　與模型組比較，銀杏提取物和銀杏+丹參醇提物配伍組的VT/VF發(fā)生率明顯降低（P<0.01，P<0.05）；其余藥物組對(duì)VT/VF發(fā)生率無顯著影響，見圖1；銀丹心腦通全方，丹參醇提物，丹參水提物，混合物，銀杏+丹參醇提物配伍，丹參醇提物+丹參水提物配伍均延長(zhǎng)了停灌后的心臟停跳時(shí)間（P<0.05），見圖2；各組均明顯縮短心臟復(fù)跳時(shí)間，恢復(fù)正常律動(dòng)時(shí)間和心率失常持續(xù)時(shí)間（P<0.05），見圖3～5。停跳時(shí)間=心臟完全停跳時(shí)間點(diǎn)-停灌時(shí)間點(diǎn)。復(fù)跳時(shí)間=復(fù)跳時(shí)間點(diǎn)-再灌時(shí)間點(diǎn)。恢復(fù)正常律動(dòng)時(shí)間=恢復(fù)正常律動(dòng)時(shí)間點(diǎn)-再灌時(shí)間點(diǎn)。心率失常持續(xù)時(shí)間=再灌后所有心率失常持續(xù)時(shí)間之和。

　　3.2對(duì)抗氧化指標(biāo)的影響

　　與空白組相比，模型組SOD活力明顯降低，MDA含量顯著升高（P<0.05）。與模型組相比較，除丹參水提物組、混合組（燈盞細(xì)辛，三七，山楂，絞股藍(lán)，大蒜，天然冰片）及銀杏+丹參水提物以外，其余各組的SOD活力均有明顯提高（P<0.05）。各給藥組均降低了MDA含量，與模型組相比，具有顯著性差異（P<0.05），見表2。

　　3.3對(duì)心肌酶指標(biāo)及cTnI的影響

　　與模型組比較，銀丹心腦通全方及丹參水提物明顯減少LDH釋放（P<0.05），其他各組與模型組均無顯著性差異；銀杏提取物、丹參醇提物、丹參水提物、銀杏+丹參醇提物均降低CK-MB（P<0.05）。與模型組比較，銀杏+丹參醇提物明顯抑制了cTnI的釋放（P<0.05），其他各組與模型組相比無明顯變化，見表3。

　　4討論

　　盡管心血管疾病的基礎(chǔ)研究及臨床治療在不斷發(fā)展，但冠心病仍發(fā)病率較高[1，9]。目前為止，冠心病的治療方法主要有溶栓、介入、外科搭橋、冠狀動(dòng)脈血管再通等[10]。但不論何種治療都會(huì)面臨心肌缺血再灌注損傷[10]。據(jù)此，盡可能的預(yù)防及減輕心肌缺血再灌注損傷是心血管研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題[11]。

　　銀丹心腦通由幾種天然中草藥制成，遵循中醫(yī)理論配伍使用能夠活血、行氣止痛、消積化滯[1]。用于治療心絞痛、氣滯引起的高血壓及中風(fēng)、血瘀、痰阻等[12]。同時(shí)，銀丹心腦通也具有增加冠脈血流量，改善心肌缺血缺氧狀況，臨床療效較好[12]。

　　本文采用離體大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，觀察銀丹心腦通及主要成分配伍對(duì)心肌的保護(hù)作用，并探討其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

　　研究結(jié)果表明，銀丹心腦通，其主要成分及主要成分配伍均對(duì)缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用。首先，銀丹心腦通全方，丹參醇提物，丹參水提物，混合（燈盞細(xì)辛，三七，山楂，絞股藍(lán)，大蒜，天然冰片）能夠延遲停灌后的心臟停跳時(shí)間，減少?gòu)?fù)灌期的心臟復(fù)跳時(shí)間、恢復(fù)正常律動(dòng)時(shí)間及心率失常持續(xù)時(shí)間，顯示對(duì)缺血再灌注損傷引起的心率失常具有保護(hù)作用。銀杏提取物對(duì)VT/VF的發(fā)生有明顯改善作用，同時(shí)減少了復(fù)灌期的心臟復(fù)跳時(shí)間、恢復(fù)正常律動(dòng)時(shí)間及心率失常持續(xù)時(shí)間。主要成分配伍對(duì)VT/VF的發(fā)生，心臟停跳時(shí)間，復(fù)跳時(shí)間，恢復(fù)正常律動(dòng)時(shí)間和心率失常持續(xù)時(shí)間也有明顯的改善作用。同時(shí)，銀丹心腦通全方及其主要成分提高缺血心肌SOD活力，降低MDA含量。結(jié)果說明銀丹心腦通、主要成分及主要成分配伍具有一定的抗氧化作用。心肌酶指標(biāo)檢測(cè)顯示，銀丹心腦通全方和丹參水提物能夠減少LDH釋放；銀杏提取物、丹參醇提物、丹參水提物降低CK-MB水平；提示銀丹心腦通及主要成分對(duì)心肌酶有一定影響。鈣超載是心肌缺血再灌注損傷發(fā)生的機(jī)制之一。本文結(jié)果表明，銀杏+丹參醇提物抑制心肌損傷過程中cTnI的產(chǎn)生，說明銀丹心腦通對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用可能與抑制鈣超載有關(guān)。綜上，銀丹心腦通、主要成分及其主要成分配伍對(duì)心肌缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用。[參考文獻(xiàn)]

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