細菌內(nèi)毒素檢查法又稱鱟試劑法，是利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)，來檢查藥品中內(nèi)毒素含量是否符合規(guī)定的方法，具有快速、靈敏，重復(fù)性好，操作簡便的特點。

　　《臨床醫(yī)藥文獻雜志》醫(yī)藥雜志投稿，是經(jīng)國家新聞出版總署批準、由國家食品藥品監(jiān)督管理總局主管、中國醫(yī)藥科技出版社主辦并出版的國家級醫(yī)學(xué)期刊。期刊為月刊，國內(nèi)統(tǒng)一刊號CN11-9355/R，國際刊號ISSN2095-8242。雜志堅持正確的辦刊方針和宗旨，圍繞國家不同時期醫(yī)藥衛(wèi)生工作的重點，結(jié)合臨床實際和重大疾病防治工作需要，并抓住學(xué)術(shù)研究中的熱點、難點和焦點問題，實施有前瞻性的編輯策劃工作。主要欄目設(shè)置有：綜述、論著、臨床交流、醫(yī)藥管理、臨床護理等欄目。

　　目的建立檢測注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉中內(nèi)毒素的試驗方法。方法運用干擾初篩法對供試品進行干擾試驗，采用鱟試劑法對樣品中的內(nèi)毒素進行檢測。 結(jié)果注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉在藥液稀釋濃度為0.016 8 mg·ml-1以下時，與鱟試劑反應(yīng)無干擾。結(jié)論所采用的細菌內(nèi)毒素檢查法可用于注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉的內(nèi)毒素檢查。

　　丹參酮ⅡA磺酸鈉為丹參酮ⅡA經(jīng)磺化而成的水溶性鈉鹽，它能增加冠脈血流量，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板集聚及抗血栓形成[1]，臨床上主要用于冠心病、心絞痛等癥的治療。本檢查法采用兩個廠家的鱟試劑對3批注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉進行了細菌內(nèi)毒素檢查的干擾試驗。現(xiàn)報道如下。

　　1 材料

　　注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉(四川大學(xué)華西藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，批號：040101、040102、040103，規(guī)格：10mg);鱟試劑(TAL：標示靈敏度0. 125 EU·ml-1，批號：0305301，標示靈敏度0.06 EU·ml-1，批號0302011，湛江安度斯生物有限公司;標示靈敏度0.06 EU·ml-1，批號20030321，湛江海洋生物制品廠);細菌內(nèi)毒素工作標準品(10 EU·支-1，批號：030723，中國藥品生物制品檢定所);細菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水：含細菌內(nèi)毒素<0.003 EU·ml-1，批號：0308050，湛江安度斯生物有限公司)。

　　XW-80旋渦混合器(上海青浦滬西儀器廠);KXB-12A恒溫培養(yǎng)箱(上海科析試驗儀器廠)。其余實驗材料均經(jīng)250℃烘烤1 h。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 鱟試劑標示靈敏度(λ)的復(fù)核以細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解內(nèi)毒素工作標準品，并配制成含內(nèi)毒素2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ系列濃度的溶液。每一濃度平行做4支，同時用細菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對照，記錄結(jié)果，并按式λC = antilg(∑X/4)計算λC值。結(jié)果表明：每一批鱟試劑靈敏度測得值均在0.5～2.0λ范圍內(nèi)，符合要求，可按標示靈敏度值使用。結(jié)果見表1。表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果(略)

　　2.2 內(nèi)毒素限值(L)的確定本品臨床用法用量為40～80 mg·60 kg-1，故

　　L=5.0 EU·Kg-1·h-11.33 mg·kg-1·h-1=3.76 EU·mg-1

　　綜合考慮本品臨床用藥的相關(guān)因素，將本品細菌內(nèi)毒素限值確定為3.75 EU·mg-1。

　　2.3 干擾試驗預(yù)試驗根據(jù)最小有效稀釋濃度，c=λ/L，可知對應(yīng)于靈敏度(λ)0.25，0.125，0.06，0.03 EU·ml-1TAL，注射用丹參酮ⅡA磺酸鈉稀釋濃度分別為0.067，0.033 5，0.016 8，0.008 38 mg·ml-1，用BET水將供試品(批號：040101)稀釋成以上4個濃度備用。

　　取16支λ為0.125 EU·ml-1的TAL，其中8支作為供試品陰性對照NPC，即分別用0.1 m1上述稀釋的4個濃度供試品復(fù)溶TAL，再各加0.1 mlBET水，每一濃度供試品 2 支反應(yīng)管;另8支作為供試品陽性對照PPC，即分別用0.1 ml上述稀釋的4個濃度供試品復(fù)溶TAL，再各加2λ(0.25 EU·ml-1)的內(nèi)毒素溶液0.1 ml，每一濃度供試品 2 支反應(yīng)管。結(jié)果見表2。本品稀釋至0.016 8 mg·ml-1以下時，可能對細菌內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)無干擾作用。故擬采用λ為0.06 EU·ml-1的TAL，本品0.016 8 mg·ml-1稀釋濃度作正式的干擾試驗。表2 樣品干擾試驗預(yù)試驗結(jié)果(略)

　　2.4 供試品干擾試驗用BET水和0.0168 mg·ml-1的供試品液分別復(fù)溶TAL(λ為0.06 EU·ml-1)，然后將每一供試品液復(fù)溶的TAL分別分為4列，每列4支;對應(yīng)各列分別加入含細菌內(nèi)毒素2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ 4種濃度的溶液。另取BET水和3批供試液各2支作為陰性對照管。于37～38℃恒溫60 min，觀察結(jié)果，并按Es=antilg(∑X/4)，Et=antilg(∑X/4)計算Es和 Et。結(jié)果Es、Et在0.5～2.0λ之間，且Et /Es的值在0.5～2.0之間，可以認為0.016 8 mg·ml-1的供試品濃度對細菌內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)無干擾作用(見表3)。表3 供試品干擾試驗結(jié)果(略)

　　2.5 供試品細菌內(nèi)毒素檢查取3批供試品用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋為0.016 8 mg·ml-1，以靈敏度為0.06 EU·ml-1 的鱟試劑依法檢查。結(jié)果見表4。結(jié)果3批樣品均符合規(guī)定。表4 供試品細菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果(略)

　　3 討論

　　由干擾預(yù)試驗可知，NPC系列反應(yīng)全部為陰性，PPC系列反應(yīng)在供試品稀釋濃度>0.033 5 mg·ml-1時為陰性，≤0.016 8 mg·ml-1時為陽性。說明供試品在較高濃度時對鱟試劑與細菌內(nèi)毒素的反應(yīng)有抑制作用，而將供試品稀釋至0.016 8 mg·ml-1(最大不干擾濃度)，并選用其對應(yīng)靈敏度的TAL后則無干擾作用。

　　本實驗結(jié)果證實，將本品適當(dāng)稀釋后對細菌內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)無干擾作用，說明采用細菌內(nèi)毒素檢查法進行本品熱原質(zhì)的安全性檢查具有可行性，可建立該品種的細菌內(nèi)毒素檢查法。

　　【參考文獻】

　　[1]華浩明，王燦暉. 不穩(wěn)定型心絞痛的研究進展及中醫(yī)藥防治概況[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2003，10(2)：123.